LyGreen （20×in water） HRM染料 使用說明書

LyGreen (20×in water) HRM染料（20×水溶液）

產(chǎn)品描述

LyGreen™核酸染料是一種新型的的雙鏈DNA結(jié)合飽和熒光染料，是新一代用于HRM分析的熒光染料，也可用于實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）。該染料結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)單體染料分子通過一個(gè)彈性臂連接成一個(gè)二聚體，在沒有DNA存在時(shí)，該結(jié)構(gòu)呈無熒光環(huán)狀結(jié)構(gòu)，一旦有DNA出現(xiàn)，則恢復(fù)隨機(jī)形態(tài)并與DNA結(jié)合發(fā)出強(qiáng)烈的綠色熒光。

與市場(chǎng)上其他熒光染料如SYBR Green I 相比，LyGreen具有如下突出優(yōu)點(diǎn)：1）高靈敏度：在推薦濃度下使用時(shí)可以獲得比SYBR Green I 更強(qiáng)的信號(hào)。2）準(zhǔn)確：結(jié)合雙鏈DNA，變形時(shí)染料不遷移，熒光信號(hào)準(zhǔn)確反映雙鏈DNA變化情況；過量染料形成二聚體，而不游離，使得LyGreen對(duì)PCR的抑制遠(yuǎn)小于SYBR Green I，因此，使用LyGreen進(jìn)行的qPCR實(shí)驗(yàn)可以使用快速PCR步驟。3）高穩(wěn)定性：在正常的儲(chǔ)存、操作和PCR過程中不會(huì)被破壞。在緩沖溶液中的染料可以安全的儲(chǔ)存在室溫或冰箱里，也可以反復(fù)凍融。4）安全性好：細(xì)胞膜穿透性測(cè)試表明，LyGreen幾乎不能穿透細(xì)胞膜，安全性高。5）兼容性：和SYBR Green I 光譜相似，使用不同品牌qPCR儀器時(shí)不許改變光譜元件設(shè)置，也無需改變操作步驟，qPCR完成后，無需加入其它核酸染料便能直接在凝膠成像系統(tǒng)下觀察分析。6）重復(fù)性好（如圖1.）：特殊設(shè)計(jì)染料，相同反應(yīng)體系下，熒光信號(hào)釋放僅與雙鏈濃度有關(guān)，線性。

此外，LyGreen在做HRM分析時(shí)，相同反應(yīng)條件下，熒光信號(hào)穩(wěn)定而持久，重現(xiàn)性好。在微流PCR，恒溫?cái)U(kuò)增，毛細(xì)管電泳，DNA定量以及細(xì)胞活力鑒定等領(lǐng)域也具有的表現(xiàn)。本品以20×LyGreen水溶液形式提供（CAT#: D1003L5000 或D1003L5001）。另外，我公司也提供LyGreen HRM分析試劑盒（CAT#: D1101L1130），僅需添加引物和模板，可以體現(xiàn)LyGreen染料優(yōu)點(diǎn)。

應(yīng)用實(shí)例

圖1. LyGreen染料用于綿羊FecB基因HRM分析.

HRM分析設(shè)備為L(zhǎng)ightCycler@480熒光定量PCR儀(德國羅氏)

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4 ºC干燥避光保存，保質(zhì)期12個(gè)月。

注意事項(xiàng)

1）做qPCR時(shí)注意設(shè)置陽性和陰性對(duì)照。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 光學(xué)性質(zhì)

激發(fā)波長(zhǎng)= 497 nm

發(fā)射波長(zhǎng)= 520nm

 實(shí)驗(yàn)方法

PCR反應(yīng)的配制（50uL）

注意事項(xiàng)

1)  請(qǐng)根據(jù)不同的儀器類型，不加入或加入合適濃度的參比染料ROX。該體系需根據(jù)所使用的Taq酶的不同進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化；

2）根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量于冰上向無菌離心管中依次加入水，Taq poLymerase buffer, dNTPs, MgCl2, LyGreen, Taq poLymerase, and primers等配制qPCR反應(yīng)體系（1×Master mix）；

3）將1×Master mix 適量分裝至無菌PCR管中，并加入DNA (50 ng/反應(yīng))；

4）按照儀器類型選擇合適的擴(kuò)增程序。