Bradford蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品描述

Bradford 法蛋白定量是基于考馬斯亮藍(lán)G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合后，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，反應(yīng)迅速而穩(wěn)定。反應(yīng)化合物在465-595nm處有最大的光吸收值，化合物顏色的深淺與蛋白濃度的高低成正比關(guān)系，因此可通過檢測595nm的光吸收值的大小來計算蛋白的含量。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。組分A在4℃保存，組分B在-20℃保存，有效期12個月。

使用方法

方案一、試管檢測

1.試劑準(zhǔn)備

(1)     取適量5mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)，PBS稀釋至終濃度為2mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)。配制后可立即使用，也可以 -20℃ 長期保存。

(2)     稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品：用與待測蛋白樣品相一致的稀釋液按下表稀釋BSA標(biāo)準(zhǔn)品。

表1：BSA標(biāo)準(zhǔn)品配制表

(3)     取干凈的試管，將30μL稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品分別加到作好標(biāo)記的試管中。

(4)     取干凈的試管，分別加入30μL待測蛋白樣品(原液或稀釋液)，并作好標(biāo)記，推薦每個樣品做2-3 個平行反應(yīng)。

2.樣品孵育及檢測

(1)     向上一步驟配制的不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品BSA和待測樣品試管中各加入1.5 mL Bradford蛋白定量試劑，充分混勻，室溫放置10 min。

(2)     用分光光度計測定595 nm 處的吸光值。

3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和計算樣品濃度

(1)     利用Excel或其他軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計算樣品中的蛋白濃度。

(2)     如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。

方案二 微孔檢測

1.試劑準(zhǔn)備

1.1 取適量5mg/mL蛋白標(biāo)準(zhǔn)，PBS稀釋至終濃度為2mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。配制后就能使用，也可-20°C長期保存。

1.2 將按表2稀釋好的BSA標(biāo)準(zhǔn)品和待測蛋白樣品（原液或稀釋液）各5μL分別加到作好標(biāo)記的96孔板微孔中。推薦每個樣品做2-3 個平行反應(yīng)。

表2：BSA標(biāo)準(zhǔn)品配制表

2.樣品孵育及檢測

(1)     每孔加入250μL Bradford蛋白定量試劑，充分混勻，蓋上96孔板蓋，室溫放置10 min。

(2)     用酶標(biāo)儀測定595 nm處的吸光值。

3.制作標(biāo)準(zhǔn)曲線和計算樣品濃度

(1)     繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品中的蛋白濃度。

(2)     如果所得到的蛋白濃度不在檢測范圍內(nèi)，請重新稀釋樣品后再次測定。

注意事項

1.     本產(chǎn)品科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.     樣品中若含有去垢劑會影響檢測結(jié)果，請試用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒。

3.     要得到更為精確的蛋白濃度結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔, 每次均應(yīng)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4.     需準(zhǔn)備 37℃ 水浴或溫箱、酶標(biāo)儀或普通分光光度計，測定波長為 465-595nm 之間，595nm最佳。酶標(biāo)儀需與 96孔酶標(biāo)板配套使用。使用分光光度計測定蛋白濃度時，試劑盒測定的樣品數(shù)量會因此而減少。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。

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